Generi Biotech - Compounds and Services for Molecular Biology

• Kvantitativní PCR
  • Soupravy pro genovou expresi
  • Soupravy pro referenční geny
  • Soupravy na zakázku
  • Probe Master Mix
  • Standardy pro qPCR
  • Interní pozitivní kontrola
• Sekvenace
  • Standardní sekvenace
  • 16S a ITS sekvenace
• Molekulární klonování
  • Klonování plasmidových konstruktů
  • Amplifikace a izolace plasmidů
  • Kompetentní bakterie
• Práce s buněčnými liniemi
  • Rekombinantní proteiny
  • Rekombinantní lidský SHBG
  • Testování cytotoxicity
  • Luminiscenční roztok
  • Detekce mykoplazmat
• Biologická identifikace
  • Autentizace buněčných linií
  • Paternitní outsourcing
• Microarray servis
  • CGH microarrays
  • GE microarrays
  • miRNA microarrays

Test cytotoxicity s neutrální červení

Cytotoxicitní test s neutrální červení je založen na schopnosti živých buněk vychytávat a vázat neutrální červeň (NČ). NČ je kladně nabité barvivo, které snadno difunduje přes buněčnou membránu buněk, akumuluje se v buněčné cytoplazmě a je skladováno v kyselém prostředí lysozomů. Podstatou testu je fakt, že NČ jsou schopny adsorbovat a vázat pouze živé buňky, zatímco u poškozených či mrtvých buněk se tato schopnost snižuje. Množství akumulované NČ je tak přímo úměrné množství živých buněk v buněčné kultuře.

Příklad

Buňky Hep2, MCF-7 a HepG2 byly nasazeny na 96 jamkovou destičku do odpovídajícího média v množstvích: 2 x 104 (Hep2), 3 x 104 (MCF-7) nebo 5 x 104 (HepG2) buněk na jamku. Po dosažení 80% konfluence bylo buňkám vyměněno médium a přidán etoposid (ETO) v příslušných koncentracích, případně DMSO jako slepý vzorek. Buňky byly inkubovány s ETO po dobu 72 hodin. Poté byl proveden test s neutrální červení. Hodnoty absorbance snížené o hodnotu slepého vzorku jsou vyjádřeny jako procenta životaschopnosti buněk vztažené ke kontrolnímu vzorku (neovlivněné buňky).

Obr. Cytotoxicita ETO v buněčných liniích Hep2, MCF-7 a HepG2 hodnocená pomocí testu s neutrální červení. Data byla zpracována v programu GrafPad Prism, verze 4. Hodnoty IC₅₀ odpovídají koncentraci ETO, při které je životaschopnost buněk 50%. N = 2; n = 3.

Citace

• Ceckova, M., Z. Vackova, et al. (2008). "Effect of ABCG2 on cytotoxicity of platinum drugs: Interference of EGFP." Toxicol In Vitro 22(8): 1846-52.
• Gramage, E., L. F. Alguacil, et al. (2008). "Pleiotrophin prevents cocaine-induced toxicity in vitro." Eur J Pharmacol 595(1-3): 35-8.
• Chen, P. J., T. Moore, et al. (2008). "Cytotoxic effects of propiconazole and its metabolites in mouse and human hepatoma cells and primary mouse hepatocytes." Toxicol In Vitro 22(6): 1476-1483.
• Kitagawa, R. R., L. M. da Fonseca, et al. (2008). "Ascorbic acid potentiates the cytotoxicity of the naphthoquinone 5-methoxy-3,4-dehydroxanthomegnin." Phytochemistry 69(11): 2205-8.
• Repetto, G., A. del Peso, et al. (2008). "Neutral red uptake assay for the estimation of cell viability/cytotoxicity." Nat Protoc 3(7): 1125-31.