Generi Biotech - Compounds and Services for Molecular Biology

• Real-time PCR sondy
  • KATALOG A CENÍK sond
  • Duálně značené sondy
  • Jednoduše značené sondy
  • Podmínky dodání
  • Objednávka sond
• Oligonukleotidy
  • Scale syntézy
  • Purifikace oligo
  • Kontrola kvality oligo
  • KATALOG A CENÍK oligo
  • Oligo bez modifikace
  • Modifikace na 3´ konci
  • Modifikace na 5´ konci
  • Modifikace fosfátové vazby
  • Modifikace na ribóze
  • RNA oligonukleotidy
  • Jiná modifikace
  • Oligo EXPRESS 24
  • Podmínky dodání
  • Objednávka oligo
• Oligo na destičce
  • Ceník
• MOJE OLIGO
  • Návod
  • Hledání
  • Demo
  • Pokročilé možnosti

Stabilita oligonukleotidů

Oligonukleotid je velmi stabilní látka, která si uchovává biologickou účinnost (např. schopnost PCR reakce) po mnoho let, pokud je uchováván v teplotách okolo -20°C. Předpokládá se, že časté rozmražování a opětné zmražování mohou vést k poklesu jeho funkce, z toho důvodu (a z důvodu omezení možnosti kontaminace PCR produkty) doporučujeme uchovávat oligo v alikvotech. Naše vlastní zkušenosti však ukazují, že oligonukleotidy zůstávají stabilní i tehdy, jsou-li podrobeny velmi špatnému zacházení

Test stability oligonukleotidů

oligonukleotidy 5´GGGTCTCTCCTCCACCTTGCAGG 3´ a 5´CCAGGGGTCCCAACTCACATCG 3´ byly rozpuštěny v destilované vodě v koncentraci 50 nmol/µl.

Typ testu A: v průběhu 20 dnů byly roztoky oligonukleotidů podrobeny 75 teplotním cyklům: zmražení na -20°C, uchování v -20°C déle než hodinu, rozmražení a inkubace 1 hodinu ve 37°C.
Typ testu B: jako varianta A, ale navíc po každém rozmražení byly roztoky oligonukleotidů nabrány pipetou do stále stejných špiček, které nebyly v průběhu 20-ti denního testu vyměněny a byly uchovávány volně na běžné pracovní ploše běžné laboratoře.

Žádný z testovaných oligonukleotidů (testovány 4 páry) nebyl žádným z těchto testů změněn tak, aby došlo ke změně chromatogramu nebo ke změně výsledku po použití v PCR reakci konané za standardních podmínek.

Obr. 1: Chromatogram oligonukleotidu 5´ GGGTCTCTCCTCCACCTTGCAGG 3´ uchovávaného ve standardních podmínkách (-20 °C)

Obr. 2: Chromatogram oligonukleotidu 5´ GGGTCTCTCCTCCACCTTGCAGG 3´, který prošel testem stability A

Obr. 3: Chromatogram oligonukleotidu 5´ CCAGGGGTCCCAACTCACATCG 3´ uchovávaného ve standardních podmínkách (-20 °C)

Obr. 4: Chromatogram oligonukleotidu 5´ GGGTCTCTCCTCCACCTTGCAGG 3´, který prošel testem stability B

Obr. 5: Jamka č. 1 (zleva): marker; jamka č. 2, 3: produkt PCR reakce s použitím standardně uchovávaných primerů (jamka 2 a 3 se liší použitou DNA); jamka č. 4, 5: produkt PCR reakce s použitím primerů, které prošly testem stability typu A (jamka 2 a 3 se liší použitou DNA); jamka č. 6, 7: produkt PCR reakce s použitím primerů, které prošly testem stability typu B (jamka 6 a 7 se liší použitou DNA). PCR: annealing 55°C, 1 min., 4,5 mM Mg 2+.