Generi Biotech - Compounds and Services for Molecular Biology

• Real-time PCR sondy
  • KATALOG A CENÍK sond
  • Duálně značené sondy
  • Jednoduše značené sondy
  • Podmínky dodání
  • Objednávka sond
• Oligonukleotidy
  • Scale syntézy
  • Purifikace oligo
  • Kontrola kvality oligo
  • KATALOG A CENÍK oligo
  • Oligo bez modifikace
  • Modifikace na 3´ konci
  • Modifikace na 5´ konci
  • Modifikace fosfátové vazby
  • Modifikace na ribóze
  • RNA oligonukleotidy
  • Jiná modifikace
  • Oligo EXPRESS 24
  • Podmínky dodání
  • Objednávka oligo
• Oligo na destičce
  • Ceník
• MOJE OLIGO
  • Návod
  • Hledání
  • Demo
  • Změna kódu moje oligo

O duálně značených sondách

Technologie duálně značených sond (nazývaných též hydrolyzační sondy nebo TaqMan^® sondy) využívá 5´-3´ exonukleázové aktivity Taq DNA polymerázy ke štěpení neprodlužovatelné sondy značené na koncích párem fluoroforů, z nichž jeden je fluoreskující (reporter) a druhý nefluoreskující - tzv. quencher (zhášeč). Sonda je navržena tak, aby její sekvence byla komplementární k určité cílové sekvenci uvnitř amplifikovaného regionu. Pokud je sonda v intaktním stavu, jsou oba fluorofory drženy v prostorové blízkosti a quencher pohlcuje (zháší) fluorescenční záření emitované reporterem. Pokud sonda zhybridizuje s cílovou sekvencí, je během elongační fáze PCR štěpena prostřednictvím 5´-3´ exonukleázové aktivity Taq DNA polymerázy, čímž dochází k prostorovému oddělení fluoroforů a zvýšení fluorescenční aktivity reporteru.

Hydrolyzační sondy jsou obvykle značeny reporterem na 5´ konci a quencherem na 3´ konci. Volba reporteru závisí na excitačních a emisních kanálech použitého real-time PCR cycleru (téměř každý real-time PCR cycler disponuje kanálem pro fluorescein - FAM). Jako zhášeče se dnes obvykle využívají quenchery typu BHQ (Black Hole Quencher), které zhášejí rozsáhlé spektrum fluoroforů a nemají autofluorescenci.

GENERI BIOTECH dodává hydrolyzační sondy značené reportery FAM a HEX v kombinaci s quencherem BHQ1 a Cy3, Cy5 a PULSAR v kombinaci s BHQ2.