|
O jednoduše značených sondáchPrincip funkce jednoduše značených sond (známých také jako FRET sondy) je založen na jevu zvaném FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer). Jde o fotofyzikální jev, při kterém dochází k přenosu energie mezi dvěma fluorofory při jejich prostorovém přiblížení. Pokud se emisní spektrum jednoho fluoroforu (tzv. donorového) překrývá s absorpčním spektrem druhého fluroforofu (tzv. akceptorového), dochází k poklesu intenzity fluorescence donorové molekuly a vyzáření energie zachycené akceptorovou molekulou v podobě fluorescenčního záření o delší vlnové délce. Systém jednoduše značených sond se skládá ze dvou oligonukleotidů, z nichž jeden je značen na 3´ konci donorovým a druhý na 5´ konci akceptorovým fluoroforem. Sondy jsou navrženy tak, aby hybridizovaly přilehle vedle sebe na templátovou DNA, kterou tvoří produkt PCR. Pokud sondy zhybridizují s cílovou sekvencí, dochází k přenosu energie mezi fluorofory donor-akceptorového páru a zvýšení fluorescenční aktivity akceptorového fluoroforu, která je měřena.
Výhodou FRET sond je možnost (ve spojení s analýzou křivky tání) provádět detekci SNP polymorfismů a mutační analýzu vůbec. GENERI BIOTECH dodává jednoduše značené sondy v kombinaci FAM/Cy5. |