Generi Biotech - Compounds and Services for Molecular Biology

• Kvantitativní PCR
  • Soupravy pro genovou expresi
  • Zavedené soupravy
  • Soupravy na zakázku
  • Standardy pro qPCR
  • Interní pozitivní kontrola
• Sekvenace
  • Standardní sekvenace
  • 16S a ITS sekvenace
• Molekulární klonování
  • Klonování plasmidových konstruktů
  • Amplifikace a izolace plasmidů
  • Kompetentní bakterie
• Práce s buněčnými liniemi
  • Rekombinantní proteiny
  • Testování cytotoxicity
  • Luminiscenční roztok
  • Detekce mykoplazmat
• Biologická identifikace
  • Autentizace buněčných linií
  • Paternitní outsourcing

XTT test

Metoda je založena na schopnosti metabolicky aktivních buněk štěpit žlutou tetrazoliovou sůl XTT za vzniku oranžového formazanového barviva. Jelikož k této přeměně dochází pouze v živých buňkách, lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu různých chemických látek. Vznikající formazanové barvivo je rozpustné ve vodě a může být přímo kvantifikováno za použití klasického spektrofotometru (ELISA reader). Odpadá tedy složité promývání nutné například u starší MTT metody. To zaručuje vysoký stupeň přesnosti XTT testu a umožňuje rychlé zpracování získaných dat.

Příklad

Buňky Hep2, MCF-7 a HepG2 byly nasazeny na 96 jamkovou destičku do odpovídajícího média v množstvích: 2 x 104 (Hep2), 3 x 104 (MCF-7) nebo 5 x 104 (HepG2) buněk na jamku. Po dosažení 80% konfluence bylo buňkám vyměněno médium a přidán etoposid (ETO) v příslušných koncentracích, případně DMSO jako slepý vzorek. Buňky byly inkubovány s etoposidem po dobu 72 hodin. Poté byl proveden XTT test. Hodnoty absorbance snížené o hodnotu slepého vzorku jsou vyjádřeny jako procenta životaschopnosti buněk vztažené ke kontrolnímu vzorku (neovlivněné buňky).

Obr. Cytotoxicita etoposidu v buněčných liniích Hep2, MCF-7 a HepG2 hodnocená pomocí XTT testu. Data byla zpracována v programu GrafPad Prism, verze 4. Hodnoty IC₅₀ odpovídají koncentraci etoposidu, při které je životaschopnost buněk 50%. N = 2; n = 3.

Citace

• Eskiocak, U., O. D. Iseri, et al. (2008). "Effect of doxorubicin on telomerase activity and apoptotic gene expression in doxorubicin-resistant and -sensitive MCF-7 cells: an experimental study." Chemotherapy 54(3): 209-16.
• Jost, L. M., J. M. Kirkwood, et al. (1992). "Improved short- and long-term XTT-based colorimetric cellular cytotoxicity assay for melanoma and other tumor cells." J Immunol Methods 147(2): 153-65.
• Khot, P. D., P. A. Suci, et al. (2008). "Candida albicans viability after exposure to amphotericin B: assessment using metabolic assays and colony forming units." J Microbiol Methods 72(3): 268-74.
• Mowat, E., S. Lang, et al. (2008). "Phase-dependent antifungal activity against Aspergillus fumigatus developing multicellular filamentous biofilms." J Antimicrob Chemother
• Scudiero, D. A., R. H. Shoemaker, et al. (1988). "Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines." Cancer Res 48(17): 4827-33.