Detekce mykoplazmat – biochemický test

Životaschopná mykoplazma v testovaném vzorku (buněčný supernatant) se lyzuje a enzymy reagují se substrátem, dochází ke konverzi ADP na ATP. Pomocí spřažené reakce s luciferázou je ze vzniklého ATP uvolněna luminiscence. Měřením poměru luminiscence před a po přidání luciferázy se dá prokázat přítomnost kontaminace.

Parametry testu

Detekční limit testu: 50 cfu/ml

Požadavky na vstupní materiál

Zákazník poskytne 1-2 ml kultivačního média, připraveného dle níže uvedeného postupu (Příprava buněk k testování)

Příprava buněk k testování

Pro zajištění spolehlivého výsledku je při přípravě vzorku
média nutné dodržet následující doporučení:

• Po rozmrazení buněčného štoku z kapalného dusíku
  kultivovat buněčnou kulturu při standardních kultivačních
  podmínkách minimálně po dobu 14 dnů.
• Buňky pěstovat v doporučeném množství média pro danou
  kultivační nádobu, nepřekračovat maximální doporučené
  množství.
• Konfluence buněk v době odběru média musí být minimálně
  80 %.
• Sběr vzorku média k testování je nutné provádět nejdříve
  2 dny po poslední výměně média.
• 1 ml odebraného kultivačního média centrifugovat
  (200 × g, 5 minut, při pokojové teplotě) a přepipetovat do
  nové zkumavky (stačí 500 μl).
• Médium lze uchovávat 6 měsíců při teplotě -80 °C.

Doprava materiálu k testování

Zachlazené (2 – 8 °C) pokud doba přepravy nepřesáhne 24 hod, v opačném případě doporučujeme dopravu na suchém ledu.

Výstup testu

Výstupem je protokol s rozpisem, jestli byla nebo nebyla prokázána přítomnost mykoplazmat.