Reakční směs

Reakční směs představuje základní krok při přípravě kompletního assay protokolu. Správné dávkování a struktura směsi mají zásadní vliv na přesnost výsledků, reprodukovatelnost a efektivitu RT-PCR analýzy. Na této stránce je uvedeno schématické znázornění doporučeného rozvržení pipetace pro vytvoření kompletní směsi, včetně podílu MASTER MIX a assay složek na jeden vzorek.

Před přípravou reakční směsi je nutné stanovit celkový počet vzorků (N) bez rezervy a zvolit předepsané objemy reagencií připadající na jeden test. Výsledná směs je následně rozdělena do jednotlivých pozic reakčního plate nebo stripů pro další analýzu RNA vzorků v rámci RT-PCR. Uvedené hodnoty objemů slouží jako modelový příklad a mohou se lišit podle typu kitu, protokolu a analýzy.

RT-PCR následně kombinuje reverzní transkripci RNA a amplifikaci cílových sekvencí v jediné reakci. Správná příprava reakční směsi minimalizuje technické odchylky, snižuje riziko inhibice PCR a pomáhá zajistit kvalitní naměřená data.

Pro podrobnější parametry, doporučené teplotní profily a validované protokoly konkrétních assay kitů doporučujeme využít produktové manuály, technické listy a informace dostupné k jednotlivým sadám v nabídce Generi Biotech.