Test je využíván pro detekci mykoplazmat v kultivačních médiích tkáňových kultur. Přítomnost mykoplazmat v buněčné linii může vést k významnému narušení a zkreslení výsledků in vitro experimentů v důsledku:
Metoda zahrnuje izolaci DNA ze vzorku kondiciovaného média eukaryotních buněk. Následně je pomocí PCR v reálném čase provedena amplifikace a detekce vysoce konzervované oblasti kódující 16S ribozomální RNA specifické pro mykoplazmata. Tato metoda slouží ke kvalitativnímu stanovení mykoplazmat ve vzorku.
Parametry testu
Používaná metoda splňuje požadavky Evropského lékopisu uvedené v kapitole 2.6.7 a vyhovuje všem požadovaným parametrům.
Detekční limit testu: 10 cfu/ml
Požadavky na vstupní materiál
Zákazník poskytne minimálně 0,5 ml kultivačního média/buněčné suspenze, připraveného dle níže uvedeného postupu (Příprava buněk k testování)
Příprava buněk k testování
Pro zajištění spolehlivého výsledku je při přípravě vzorku média nutné dodržet následující doporučení:
- Konfluence buněk v době odběru média musí být minimálně 80 %.
- Sběr vzorku média k testování je nutné provádět nejdříve 2 dny po poslední výměně média.
- Minimálně 0,5 ml odebraného kultivačního média inkubovat při 95°C/10 minut. Poté centrifugovat (11 000 × g, 15 sekund) a uložit do -20°C.
- V případě testování suspenzních buněk je požadovaná maximální koncentrace 1×10^6 buněk/ml.
Doprava materiálu k testování
Zachlazené (2 – 8 °C) pokud doba přepravy nepřesáhne 24 hod, v opačném případě doporučujeme dopravu na suchém ledu.
Výstup testu
Výstupem je protokol s prokázanou či neprokázanou detekcí mykoplazmat ve vzorku.